ACOMPANHAMENTO DA EFICIÊNCIA DE SISTEMA DE TRATAMENTO DE EFLUENTES DO TIPO WETLAND

Resumo

Introdução: A avaliação da dinâmica de populações de bactérias nitrificantes e desnitrificantes ativas presentes no maciço filtrante de wetlands construídos verticais de fundo saturado sob diferentes condições operacionais, é fundamental para maximizar a remoção de nitrogênio presente no esgoto sanitário. Nesse contexto, a utilização de novas ferramentas, especialmente as moleculares, é de extrema importância para a melhor compreensão da dinâmica de populações microbiana, entretanto, a etapa de seleção e otimização dos parâmetros é crítico para atingir esse objetivo. Objetivo: Utilizar as técnicas de qPCR e RT-qPCR para análise quantitativa de bactérias, assim como, a quantificação de expressão dos genes amoA e nosZ, de bactérias nitrificantes e desnitrificantes. Método: Nesta etapa do trabalho foi enfatizado uma revisão visando a obtenção dos principais organismos alvos para estudo e genes ligados ao processo a ser analisado, portanto a definição dos primers ou iniciadores para as técnicas, assim como, a busca de metodologias de extração de DNA e RNA de bactérias dentro do sistema de tratamento Wetland. Além disso, foi realizado o acompanhamento para implantação do sistema de Wetland do tipo vertical de fundo saturado e coleta de amostra para os testes. Resultados: Com as pesquisas foram definidas as estratégias para as análises moleculares onde foi seleciona o rRNA ribossomal 16S como comparativo de expressão gênica e determinação da população encontrada no sistema de tratamento, sendo para tal, indicados os primers 1055f

(5`-ATGGCTGTCGTCAGCT-3´) e  1392r(5´-ACGGGCGGTGTGTAC-3´), assim como para as análises dos genes amoA e e nosZF, os quais codificam para as enzimas α-amônia mono-oxigenase e óxido nitroso redutase, respectivamente. Assim, foram selecionadas para as eubacterias os primers amoA1F (5´-GGGGTTTCTACTGGTGGT-3´) e amoA2r (5´-CCCCTCKGSAAAGCCTTCTTC-3´), para archeobacteria  amoA 19Fw (5´-ATGGTCTGGYTWAGACG-3´) e amoA FRv (5’-GATGTCCARGCCCARTCAG-3’) e os primers nosZF (5’-WCSYTGTTCMTCGACAGCCAG-3’) e nosZR (5’-ATGTCGATCARCTGVKCRTTYTC-3’) para o gene nosZ de eubacteria. As primeiras análises demonstram que é possível extrair material genético para amplificação por PCR e RNA total para a RT-PCR mesmo com as sugidades inerentes aos efluentes para a detecção das bactérias e da expressão dos genes do sistema de Wetland. Conclusão: As análises preliminares demonstram que os sistema implantado é ativo, possuindo microrganismos que atuam no processo, entretanto, é necessário o aprofundamento e continuidade deste estudo para a partir da utilização de técnicas moleculares possa ser utilizada como ferramenta de acompanhamento.