VARIABILIDADE INTRAESPECÍFICA DA PROTEÍNA FLAGELAR LIGADORA DE CÁLCIO (FCaBP) DE Trypanosoma rangeli
Resumo
A doença de Chagas constitui um dos principais problemas de saúde pública nas Américas. Seu agente etiológico, o Trypanosoma cruzi Chagas, 1909, compartilha com Trypanosoma rangeli Tejera, 1920, regiões geográficas, assim como hospedeiros, sendo comum ocorrerem infecções mistas, o que dificulta o diagnóstico da doença; a reatividade cruzada gera resultados falso-positivos com T. cruzi e T. rangeli, dificultando o diagnóstico sorológico da doença de Chagas. No entanto, algumas diferenças moleculares desses parasitos podem ser localizadas e utilizadas como biomarcadores específicos. Diante disso, este trabalho buscou avaliar a variabilidade intraespecífica da Proteína Flagelar Ligadora de Cálcio (FCaBP) de T. rangeli em quatro diferentes cepas, pois essa proteína se apresenta como possível alvo molecular para diagnóstico diferencial dos parasitos. Para isso, foram desenhados iniciadores para a amplificação por meio da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) e posterior sequenciamento do gene de FCaBP de T. rangeli (TR-FCaBP-F 5' AGG CGA TAG TAG CAC AAT TCA G 3') e (TR-FCaBP-R 5' TCT GTC CAG CTC CTT GAA C 3'). A análise in silico do gene da FCaBP nas cepas Choachí, SC58, Macias e LDG de T. rangeli, revelou alta similaridade entre as cepas desse parasito, contudo, observou-se a ausência de seis resíduos de aminoácidos na região N-terminal quando comparada à proteína homóloga de T. cruzi. Essa região confere a distinção de um epítopo exclusivo ao T. rangeli (SKSSAGNKDGKSATD), tornando-se um potencial marcador específico para o T. rangeli em diagnóstico sorológico diferencial ao T. cruzi.
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Referências
AFCHAIN, D. et al. Antigenic make-up of Trypanosoma cruzi culture forms: identification of a specific component. Journal of Parasitology, v. 65, n. 4, p. 507-14, ago. 1979.
CUBA CUBA, C.A. Revisión de los aspectos biológicos y diagnósticos del Trypanosoma (Herpetosoma) rangeli. Revista da Sociedade Brasileira de Medicina Tropical, v. 31, n. 2, p. 207-220, 1998.
GIFFORD, J. L.; WALSH, M. P.; VOGEL, H. J. Structures and metal-ion-binding properties of the Ca2+-binding helix–loop–helix EF-hand motifs. Biochemical Journal, 405, p. 199–221, 2007.
GRISARD, E. C. et al. Characterization of Trypanosoma rangeli Strains Isolated in Central and South America: an Overview. Memórias do Instituto Oswaldo Cruz, Rio de Janeiro, vol. 94(2): 203-209, mar./abr. 1999.
GUHL, F. et al. Molecular characterization and diagnosis of Trypanosoma cruzi and Trypanosoma rangeli. Archives of Medical Research, 33(4), 362–70, 2002.
GUHL, F.; VALLEJO, G. A. Trypanosoma (Herpetosoma) rangeli Tejera, 1920: An Updated Review. Memórias do Instituto Oswaldo Cruz, Rio de Janeiro, vol. 98(4): 435-442, jun. 2003.
LEE, M. G., et al. A putative flagellar Ca2+-binding protein of the flagellum of trypanosomatid protozoan parasites. Nucleic Acids Research, v. 18, n. 14, 1990.
MARQUEZ, D.S., et al. Trypanosoma rangeli: RAPD-PCR and LSSP-PCR analyses of isolates from southeast Brazil and Colombia and their relation with KP1 minicircles. Experimental Parasitology, 117, p. 35–42, 2007.
MORAES, M. H. de et al. Different serological cross-reactivity of Trypanosoma rangeli forms in Trypanosoma cruzi-infected patients sera. Parasites & Vectors, 1:20, 2008.
PORCEL, B. M. et al. Trypanosoma rangeli and Trypanosoma cruzi: Molecular Characterization of Genes Encoding Putative Calcium-Binding Proteins, Highly Conserved in Trypanosomatids. Experimental Parasitology, 84, p. 387–399, 1996.
RECINOS, R. F., KIRSHHOFF, L.V., DONELSON, J.E.,. Characterization of kinetoplast DNA minicircles in Trypanosoma rangeli. Molecular and Biochemical Parasitology, 63, p. 59–67, 1994.
REGITANO, L. C. de A. Extração de DNA para aplicação em Reação em Cadeia de Polimerase (PCR). In: Regitano, L.C. de A.; COUTINHO, L.L. Biologia molecular aplicada à produção animal. Brasília: EMBRAPA. Informação Tecnológica, p. 181-186, 2001.
SAMBROOK, J.; RUSSEL, D.W. Molecular Cloning: A Laboratory Manual. 3th. ed. New York: Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2001.
STURM, N.R., DEGRAVE, W., MOREL, C., SIMPSON, L. Sensitive detection and schizodeme classification of Trypanosoma cruzi cells by amplification of kinetoplast minicircle DNA sequences: use in diagnosis of Chagas’ disease. Molecular and Biochemical Parasitology. 33, p. 205–214, 1989.
THOMPSON, J. D. et al. The CLUSTAL_X windows interface: flexible strategies for multiple sequence alignment aided by quality analysis tools. Nucleic Acids Resource, 25 (24): 4876-82, dez.1997.
VALLEJO, G. A. et al. Species specific detection of Trypanosoma cruzi and Trypanosoma rangeli in vector and mammalian hosts by polymerase chain reaction
amplification of kinetoplast minicircle DNA. Acta Tropica, 72, p. 203–212, 1999.
VALLEJO, G. A. et al. kDNA markers define two major Trypanosoma rangeli lineages in Latin-America. Acta Tropica, 81, 77–82, 2002.
WAGNER, G. et al. The Trypanosoma rangeli trypomastigote surfaceome reveals novel proteins and targets for specific diagnosis. Journal of Proteomics, 82, p. 52–63, mar. 2013.
WINGARD, J. N. et al. Structural insights into membrane targeting by the flagellar calcium-binding protein (FCaBP), a myristoylated and palmitoylated calcium sensor in Trypanosoma cruzi. Journal of Biological Chemistry., v. 283, n. 34, p. 23388-96, ago. 2008.
WU, Y. et. al. The gene family of EF-hand calcium-binding proteins from the flagellum of Trypanosoma brucei. Biochemical Journal, 304, p. 833-841, 1994.
ZINGALES, B. et al. A new consensus for Trypanosoma cruzi intraspecific nomenclature: second revision meeting recommends TcI to TcVI. Memórias do Instituto Oswaldo Cruz, v. 104, n. 7, p.1051-4, nov. 2009.
