CARACTERIZAÇÃO MOLECULAR DE UMA PROTEÍNA HIPOTÉTICA DE SUPERFÍCIE DE TRYPANOSOMA RANGELI - Cousseau, Cristiane; Nardi, Geisson Marcos; Kroth, Adarly; Wagner, Glauber (Seminário de Iniciação Científica e Seminário Integrado de Ensino, Pesquisa e Extensão (SIEPE), 2016)
O Trypanosoma rangeli é um parasita hemoflagelado, muito similar genéticamente e antigenicamente com o Trypanosoma cruzi, agente etiológico da Doença de Chagas. Porém, se tem conhecimento de vários genes exclusivos de cada espécie, e no T. rangeli, alguns destes genes codificam proteínas hipotéticas, que ainda não foram caracterizadas. Neste contexto, o objetivo deste estudo foi expressar uma proteína hipotética de superfície do T. rangeli, para posterior avaliação desta em diagnósticos sorológicos específicos. Primeiramente foi realizada busca no genoma para se obter uma proteína hipotética específica do T. rangeli, sendo selecionada a proteína hipotética KC544871. Com posse da sequência de nucleotídeos, um par de iniciadores específicos para amplificar a sequência que codifica a proteína de interesse a ser estudada foi construído. A amplificação deste gene foi realizada através de PCR, gerando o produto esperado de 795pb. Após foi realizado o processo de clonagem em vetor pGEM T-easy e o sequenciamento confirmou a identidade correta do inserto. Em seguida este inserto foi subclonado no vetor pET-14b e transformado em Escherichia coli BL21(DE3), para expressão. Até o presente momento, foi possível avaliar a expressão desta proteina através de Western blotting utilizando anticorpo anti-Histag, onde foi possível verificar a expressão da proteína de 29kDa na fração insolúvel do extrato proteico obtido, fato esperado por se tratar de uma proteína de membrana. Esta proteína encontra-se em fase de putificação para posteiror testes de citolocalização e imunogenicidade.