A Campsiandra laurifolia REDUZ A LESÃO TECIDUAL E A INFLAMAÇÃO EM RATOS COM COLITE ULCERATIVA INDUZIDA POR ÁCIDO ACÉTICO

FONSECA, Sandielly Rebeca Benitez1@; SOUZA, Lucas Petitemberte2; SCHEMITT, Elizângela Gonçalves1; BRASIL, Marilda da Silva3; ENGEROFF, Millena de Oliveira4; ADAMI, Gabriela Girardi4; COLARES, Josieli Raskopf1; FILLMANN, Henrique Sarubbi5; MARRONI, Norma Possa1,3.

@Autor correspondente: Sandielly Rebeca Benitez Fonseca. sandielly.benitez@gmail.com.

Introdução: A retocolite ulcerativa (RCUI) é uma doença inflamatória intestinal que afeta a mucosa e a submucosa do intestino grosso. O excesso na produção de espécies reativas de oxigênio (ERO) leva ao estresse oxidativo que tem envolvimento direto no processo inflamatório da RCUI. Estudos comprovaram que o extrato aquoso da Campsiandra laurifolia, também conhecida como acapurana, possui alto teor de compostos fenólicos e taninos totais, bem como um elevado potencial antioxidante. A RCUI é uma doença de etiologia não totalmente conhecida que afeta pessoas jovens e que apresenta aumento na prevalência mundial, sendo que as possibilidades terapêuticas atuais são de eficácia variável e sem evidência de cura. O extrato aquoso da acapurana é um possível agente terapêutico na RCUI devido ao seu alto potencial antioxidante. Objetivo: Avaliar o efeito da Campsiandra laurifolia sobre a colite ulcerativa induzida por ácido acético. Método: O estudo foi realizado no Hospital de Clínicas de Porto Alegre e aprovado pela CEUA com o número 2019-0196. Foram utilizados 24 ratos Wistar machos, com 60 dias e em média 350 gramas. Os animais foram divididos em 4 grupos: controle (CO), controle+acapurana (CO+A), colite (CL) e colite+acapurana (CL+A). A indução da colite foi feita por enema com 4 ml de ácido acético a 4%. O extrato da acapurana foi administrado via gavagem na dose de 25mg/Kg por dois dias nos grupos CO+A e CL+A. No 4º dia os animais foram mortos e o tecido intestinal foi coletado para análise histológica e para avaliação da expressão do NFκB e da iNOS por imunohistoquímica. Uma escala de danos microscópicos foi utilizada para mensurar o dano histológico. A análise estatística foi ANOVA seguido do teste Student Newman Keuls (média±EP) significativo quando p<0,05. Resultados: Na análise histológica do grupo CL+A observou-se regeneração das criptas, diminuição da hemorragia e da inflamação em relação ao grupo CL, ficando semelhantes aos grupos CO e CO+A. A pontuação na escala de danos microscópicos aumentou significativamente no grupo CL em relação aos grupos controles, já nos animais do grupo CL+A houve redução significativa desta pontuação em relação ao grupo CL. Na quantificação da expressão dos mediadores inflamatórios NFκB e iNOS constatou-se que no grupo CL houve um aumento significativo em relação aos grupos CO e CO+A, sendo que esta expressão reduziu significativamente no grupo CL+A em relação ao grupo CL. Em relação ao grupo CO+A, não se observou diferença significativa em nenhuma das análises realizadas quando comparado ao grupo CO. Conclusão: Diante dos dados apresentados, sugere-se que o extrato aquoso da Campsiandra laurifolia reduziu a lesão tecidual e o processo inflamatório em ratos Wistar com colite ulcerativa induzida por ácido acético.

Palavras-chave: Estresse Oxidativo. Colite Ulcerativa. Antioxidante.

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A EDUCAÇÃO EM SAÚDE PARA PREVENÇÃO DAS COMPLICAÇÕES DO DIABETES MELLITUS

DIAS, Jordana Silva1@; NOGUEIRA, Esther Marina Beraldo2; ABRANTES, Gabriela Maria Candido Faria2; BARBOSA, Paula Gabriela Ferreira3; QUEIROZ, Pedro Paulo Borba1; MAZZARO, Marcia Carolina4; MARTINS, Marlene Andrade5; FARÃO, Elaine Miguel Delvivo5.

@Autor correspondente: Jordana Silva Dias. jordana.dias@discente.ufj.edu.br.

Introdução: O Diabetes Mellitus (DM), é uma doença crônica não transmissível em que o paciente apresenta um quadro hiperglicêmico sérico. Quando estabelecido, o DM pode aumentar drasticamente a morbidade dos pacientes por meio de suas complicações, ou por tornar estes mais suscetíveis ao agravamento dos quadros em outras doenças, além de se apresentar como grande fator de oneração do Sistema de Saúde. Nesse sentido, as ações de educação em saúde são importantes para favorecer a qualidade de vida desses pacientes e minimizar as complicações agudas e crônicas decorrentes da doença. Assim, os integrantes do projeto de extensão “Reflexões Sobre as Necessidades em Saúde do Usuário com Diabetes Mellitus” da Universidade Federal de Jataí (UFJ) promovem ações de educação em saúde no município. Objetivo: relatar as ações de extensão voltadas para a promoção da educação em saúde acerca das complicações do diabetes realizadas na UBS do município de Jataí. Método: Em abril e maio de 2022 foram elaborados materiais impressos para serem distribuídos na UBS escolhida para campo de atuação dos discentes durante as atividades de extensão. O tema escolhido para a ação foi o “Pé diabético” tendo em vista a possibilidade de prevenção e necessidade de cuidado relatada pela equipe da unidade de saúde. O material elaborado foi preparado com linguagem simples e figuras ilustrativas favorecendo a compreensão dos usuários da unidade. As salas de espera tiveram duração média de vinte minutos sendo divididas em três momentos: explanação inicial da temática, demonstração e distribuição do material ilustrativo e por último dinâmica para favorecer o esclarecimento de dúvidas e a participação dos usuários. Resultados: Foram realizadas duas salas de espera na UBS, com média de dez participantes por sala de espera realizada. Foi executado uma explicação inicial sobre a temática com a demonstração do pé das discentes para os usuários presentes na sala de espera da UBS, a fim de chamar a atenção para a temática. Após este primeiro contato com o tema “pé diabético”, os participantes presentes demonstraram interesse no assunto, por meio de questionamentos. Sendo observado pela equipe interdisciplinar que os usuários possuíam déficits no conhecimento sobre a DM e suas complicações. No panfleto distribuído foi colocado uma receita prática de bolo de banana sem açúcar, favorecendo a adoção de hábitos saudáveis. Após as explicações, os pacientes foram encorajados a tirar suas dúvidas acerca do assunto, sendo realizada educação em saúde de forma individual para três usuários da unidade. Todos os usuários participaram da dinâmica proposta, favorecendo a compreensão da temática abordada. Conclusão: Em virtude do exposto, fica evidente a necessidade de realizar regularmente atividades educativas em saúde nas salas de espera, a fim de alcançar a população leiga, proporcionando o compartilhamento de conhecimento de forma coletiva, a interação com escuta ativa individual após o encerramento da atividade, favorecendo a prevenção de complicações da doença e consequentemente melhora na qualidade de vida das pessoas. Além disso, o momento de espera para o atendimento nas unidades torna-se mais produtivo, aumentando as possibilidades de educação em saúde para a comunidade.

Palavras-chave: Complicações do Diabetes. Educação em Saúde. Salas de Espera.

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A GLUTAMINA PROTEGE O FÍGADO CONTRA OS PARÂMETROS DE MORTE CELULAR NA INSUFICIÊNCIA HEPÁTICA AGUDA GRAVE EXPERIMENTAL

SCHEMITT, Elizângela Gonçalves1@; FONSECA, Sandielly Rebeca Benitez da1; BRASIL, Marilda da Silva1,2; MARTINS, Gabriela dos Santos1,2; ENGEROFF, Millena de Oliveira1,3; ADAMI, Gabriela Girardi1,3; MARRONI, Norma Possa1,2,4..

@Autor correspondente: Elizângela Gonçalves Schemitt. elizschemitt@yahoo.com.br.

Introdução: A Insuficiência Hepática Aguda Grave (IHAG) é caracterizada por disfunção repentina das células hepáticas. Em condições de estresse celular pode ocorrer uma perturbação no sistema de proteção da célula que ativa as vias de sinalização de morte celular. A glutamina (Gln) é considerada um aminoácido que possui muitas funções metabólicas essenciais. Objetivo: Avaliar a ação da glutamina sobre as perturbações celulares decorrentes da IHAG em ratos. Método: Foram utilizados 28 ratos, divididos nos grupos CO, G, TAA, TAA+G. Duas doses do xenobiótico tioacetamida foram administradas (400 mg/kg ip) em um intervalo de oito horas. Três doses de Gln (25 mg/kg ip) foram administradas em intervalos de 12 horas. Ao final de 48 horas, os animais foram mortos. O fígado foi coletado para análise de proteínas envolvidas nas vias de sinalização celular, apoptose e autofagia pela técnica de Western Blot. Fragmentos do fígado foram utilizados para avaliação histológica. Análise estatística: ANOVA+Student-Newman-Keuls (significativo quando p<0,01) TAA+G (p<0,001). A expressão da proteína Bcl-2 apresentou-se diminuída no grupo TAA em relação aos grupos controles (p<0,001) e aumentada no grupo que recebeu a Gln como tratamento (p<0,001). A proteína desencadeadora Bax e a proteína efetora da apoptose, caspase 3 estavam aumentadas no grupo TAA em relação aos grupos CO e CO+G (p<0,05) e essa expressão diminuiu significativamente no grupo dos animais tratados com Gln (p<0,05). Ao analisar a expressão das proteínas envolvidas no processo autofágico (mTOR, Beclin1 e LC3α/β) foi observado um aumento significativo no grupo TAA em relação aos grupos controle (p<0,01) e uma diminuição significativa no grupo TAA+G quando comparado ao grupo TAA (p<0,05). Na avaliação histopatológica a Gln promoveu uma re-estruturação do parênquima hepático com diminuição do infiltrado inflamatório, da balonização e das áreas com necrose. Conclusão: A Gln diminuiu a apoptose, a autofagia e a necrose hepática, contribuindo dessa forma para a sobrevivência celular no modelo experimental de IHAG.

Palavras-chave: Apoptose. Autofagia. Insuficiência Hepática.

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A LIMITAÇÃO DA CONSTRUÇÃO DO NINHO INDUZIU COMPORTAMENTO PRECOCE TIPO-DEPRESSIVO NA PROLE

PEREIRA, Luiza1@; DA RÉ, Teresa¹; ROCHA, Bianca¹; CASTILHO, Debora2; Giusti- Paiva A.²; VILELA, F.C².

@Autor correspondente: Luiza Pereira. luiza.pereira@sou.unifal-mg.edu.br.

Introdução: O modelo de Limitação da Construção do Ninho (LCN) mimetiza a negligência materna. Ao reduzir a quantidade de maravalha disponível, cria-se um ambiente que dificulta o cuidado materno essencial, resultando na exposição dos filhotes ao estresse precoce. O estresse no início da vida gera efeitos adversos nas funções do eixo hipotálamo-hipófise-adrenal e pode tornar o indivíduo mais vulnerável ao desenvolvimento de psicopatologias, como transtornos depressivos. Objetivo: O objetivo deste estudo foi investigar se os animais submetidos a negligência materna pelo LCN apresentam comportamento precoce tipo-depressivo na prole. Método: Para realização dos experimentos foram utilizadas ratas prenhes Wistar divididas em grupos Controle e LCN (n=8 por grupo). No dia pós-natal 1 (PND1) os filhotes foram padronizados em 4 machos e 4 fêmeas e pesados a cada 3 dias em ninhada até o desmame. Após o desmame foram pesados individualmente até o dia dos testes. As progenitoras foram pesadas no mesmo intervalo a cada 3 dias até o desmame. No PND2 ao PND9 os animais do grupo LCN foram mantidos em caixas com maravalha reduzida (1500mL) e o Controle com maravalha normal (4500 mL), o projeto aprovado pelo protocolo CEUA: 0006/2022. No PND5 e PND7 foi feita a avaliação do comportamento materno (CM) das mães e, paralelamente, no PND6 foi feito o teste de Campo Aberto nas progenitoras. No PND26-PND28 a prole foi avaliada pelos testes: Campo Aberto, Nado Forçado, Comportamento Social de Brincar. Os resultados obtidos foram expressos como média ± erro padrão da média e analisados por two-way ANOVA seguido por pós-teste de Bonferroni ou t-Student. Resultados: No CM observou-se no PND5, que as progenitoras submetidas ao LCN, reduziram o tempo de lambida quando comparados ao grupo controle (406,00±69,01 para 243,00±47,59 s; p<0.05). No PND7, as progenitoras LCN aumentaram a latência para pegar o 1º filhote (18,75±4,49 para 78,63±31,06 s; p<0.05), a latência para construir o ninho(172,60±40,58 para 706,60±288,20 s; p<0.05), o tempo de self-grooming (24,63±8,22 para 43,38±5,96 s; p<0.05) e diminuíram o tempo de lambida(757,90±72,75 para 566,60±37,67 s; p<0.05) quando comparados com as do grupo controle. No teste de nado forçado, os machos e fêmeas LCN apresentaram um maior tempo de imobilidade quando comparados com grupo controle (18,75±3,34 para 42,00±9,09 s; p<0.001) e (16,88±2,29 para 52,88±7,59 s; p<0.05)

respectivamente. Não houve diferença entre os grupos experimentais no teste de campo aberto e comportamento social de brincar. Conclusão: O modelo de Limitação da Construção do ninho foi capaz de reduzir o comportamento materno e impactou no desenvolvimento de comportamento tipo-depressivo na prole.

Palavras-chave: Negligência Materna. Limitação da Construção do Ninho. Depressão.

Apoio financeiro: CNPq, Capes e Fapemig.

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A SUPLEMENTAÇÃO DE ÔMEGA-3 EM RATOS WISTAR NÃO ATENUA AS RESPOSTAS COMPORTAMENTAIS E NEUROINFLAMATÓRIAS PROVOCADAS POR DIETA DE CAFETERIA

DIAS, Victor1; JANTSCH, Jeferson2; RODRIGUES, Fernanda2; NETO, João2; GIOVENARDI, Marcia2,3; PORAWSKI, Marilene2,4; GUEDES, Renata Padilha 2,3@.

@Autor correspondente: Renata Padilha Guedes. renata.guedes@ufcspa.edu.br.

Introdução: Nas últimas décadas a obesidade tem crescido em proporções pandêmicas. Além de provocar doenças cardiovasculares e disfunções metabólicas, mais recentemente, a obesidade tem sido relacionada a doenças no sistema nervoso central (SNC) por gerar neuroinflamação, desencadeando comprometimento de funções cognitivas e emocionais. Os ácidos graxos da família do ômega-3 têm potencial anti-inflamatório e neuroprotetor, e por isso, podem minimizar os impactos causados pela obesidade. Objetivo: Avaliar os efeitos da suplementação de ômega3 em marcadores neuroinflamatórios e memória social de ratos com obesidade. Método: Ratos Wistar machos receberam dieta de cafeteria (CAF) por um período de 20 semanas. Entre a 16ª e a 20ª semana, foi realizada suplementação de omega-3 (500 mg/Kg) por gavagem. Após a eutanásia, o hipocampo e o córtex cerebral foram coletados para análise do perfil de ácidos graxos saturados, bem como a expressão proteica de Toll-like receptor 4 (TLR-4) e Claudina-5. Resultados: No córtex cerebral, foram encontradas concentrações aumentadas dos ácidos caprílico, miristoleico e palmítico em resposta à suplementação com ômega-3. Foi encontrado aumento de TLR-4 nos animais do grupo CAF, sem efeito do ômega-3; já no hipocampo não houve diferenças significativas na expressão de TLR-4. A expressão de claudina-5 diminuiu no hipocampo do grupo CAF, sem diferenças no córtex cerebral. A respeito do teste de memória social, houve um aumento da exploração do animal intruso nos grupos que receberam CAF, independentemente da suplementação de ômega-3, indicando uma maior capacidade de reconhecimento nos animais obesos. Conclusão: Os animais com obesidade induzida por meio da dieta de cafeteria manifestaram aumento na concentração de ácido palmítico no córtex cerebral. No entanto, a suplementação com ômega-3 não foi capaz de reverter o estado neuroinflamatório causado por este ácido graxo de cadeia longa. Também observamos um aumento na expressão de TLR-4 nos grupos CAF, o que pode indicar que a severidade da obesidade causada pela dieta pode inibir as ações do ômega-3. Ademais, os grupos CAF demonstraram melhora nas capacidades sociais dos animais, porém, novos estudos devem ser realizados para compreender melhor os mecanismos dessa resposta comportamental.

Palavras-chave: Obesidade. Neuroinflamação. Interação Social.

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A SUPLEMENTAÇÃO DE ÔMEGA-3 TEM EFEITOS LIMITADOS SOBRE A DISFUNÇÃO METABÓLICA E DISBIOSE PROVOCADAS PELA OBESIDADE

MILCZARSKI, Vitória Luiza de Camargo1; JANTSCH, Jeferson2; RODRIGUES, Fernanda2; NETO, João2; GIOVENARDI, Márcia2,3; PORAWSKI, Marilene2,4; GUEDES, Renata Padilha2,3@.

@Autor correspondente: Renata Padilha Guedes. renata.guedes@ufcspa.edu.br.

Introdução: A dieta ocidental consiste em alto consumo de alimentos ultraprocessados com concentrações elevadas de açúcares e gorduras e alto índice calórico, o que predispõe ao desenvolvimento de obesidade. As alterações metabólicas decorrentes da obesidade podem desencadear um quadro inflamatório sustentado, acompanhado de disbiose da microbiota intestinal. A disbiose consiste no desequilíbrio entre as principais bactérias simbióticas da microbiota intestinal, que em indivíduos saudáveis é composta principalmente pelos filos Bacteroidetes, Firmicutes, Actinobacteria, Proteobacteria, e Verrucomicrobia. Ainda, essas alterações podem ser acompanhadas de aumento na translocação de lipopolissacarideo (LPS) para a circulação, e redução na produção dos ácidos graxos de cadeia curta (AGCC). Os ácidos graxos da família ômega-3 (n3) têm ação anti- inflamatória e apresentam efeitos benéficos sobre as disfunções metabólicas, podendo ser um aliado no combate aos efeitos deletérios da obesidade. Objetivo: Analisar o efeito da suplementação de ômega-3 em ratos obesos sobre a morfologia intestinal, índices séricos de LPS e AGCC, em consonância com a avaliação da composição de bactérias na microbiota intestinal. Método: 48 ratos Wistar machos foram divididos em quatro grupos: um grupo alimentado com uma dieta de cafeteria (CAF), a qual é constituída de alimentos palatáveis frequentemente consumidos pela sociedade ocidental; um grupo alimentado com CAF suplementado com n3 (CAF+n3); um grupo controle alimentado com uma dieta padrão de biotério (CT); e um grupo controle suplementado com n3 (CT+n3). Amostras de intestino grosso foram processadas para histologia e coradas com hematoxilina e eosina. A análise da composição da microbiota intestinal foi feita por sequenciamento de nova geração. Por fim, foi realizada cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas para a quantificação de LPS e AGCC no plasma. Resultados: Houve uma diminuição da profundidade das criptas intestinais dos animais que receberam CAF. A suplementação com n3 foi capaz de causar aumento na profundidade das criptas apenas nos animais CT, mas não nos obesos. Quanto à microbiota intestinal, foi observada uma razão aumentada de Firmicutes/Bacteroidetes nos animais tratados com n3. Ainda, foi encontrada uma menor diversidade bacteriana nos animais obesos, porém, sem efeito do n3. Houve um aumento de Proteobacteria no grupo que recebeu CAF em relação àquele com CAF+n3 e uma queda de Actinobacteria nos animais do grupo CAF. Sobre os AGCC, notou-se a presença elevada de acetato, butirato, isobutirato e isocaproato nos grupos que receberam CAF. A suplementação com n3 diminuiu os níveis de butirato e isobutirato nos animais obesos. Por fim, houve um aumento nos níveis de LPS nos animais alimentados com CAF, entretanto, a suplementação com n3 foi capaz de atenuar este efeito. Conclusão: A CAF provocou alteração da composição da microbiota intestinal e disbiose, aumento dos níveis de AGCC e de LPS. O ômega-٣, por sua vez, não reverteu todas as alterações provocadas pela obesidade, mas reduziu os níveis de LPS, o que indica que sua utilização pode ser benéfica no sentido de reverter a endotoxemia metabólica, característica da obesidade.

Palavras-chave: Microbiota. LPS. Inflamação.

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ABORDAGEM MULTI INSTRUMENTAL PARA AVALIAÇÃO DA INFLUÊNCIA DO OMEPRAZOL EM PROCESSOS DE DISSOLUÇÃO DE COMPRIMIDOS MAGNÉTICOS

BARBOZA, João M.1@; SILVA, Mateus P. P.1; STOPPA, Erick G.2; BURANELLO, Laís P.2; SOARES, Guilherme A.2; MIRANDA, José R. A.2

@Autor correspondente: João M. Barbosa. jm.barboza@unesp.br.

Introdução: A farmacomagnetografia consiste na utilização de uma técnica biomagnética aliada à análises farmacocinéticas, simultaneamente, afim de avaliar o comportamento de formas farmacêuticas sólidas no trato gastrointestinal (TGI) humano e a concentração plasmática do fármaco, essa abordagem multi instrumental permite avaliar a influência exercida pelas variáveis do TGI na administração de fármacos. Objetivo: O estudo consiste na utilização da farmacomagnetografia para avaliar a influência do Omeprazol na liberação e absorção do Metronidazol, administrado por via oral em comprimidos magnéticos revestidos. Método: Os comprimidos magnéticos foram obtidos por compressão direta em prensa hidráulica, contendo 100mg de Metronidazol e revestidos com Eudragit® E-100. Para os ensaios in-vivo foram selecionados 12 voluntários hígidos, participando em duas fases do projeto (placebo e omeprazol) em diferentes dias para avaliação da biodisponibilidade do Metronidazol Resultados: Foram observadas alterações conforme o aumento do pH da solução e retardo no processo de dissolução do Metronidazol, mostrando que o aumento do pH interfere nos processos de liberação de comprimidos revestidos com E-100. Conclusão: Esse estudo demonstrou que a farmacomagnetografia se mostra eficiente como ferramenta para análises correlativas multi instrumentais de processos de desintegração e biodisponibilidade de fármacos.

Palavras-chave: Farmacomagnetografia; Biosusceptometria de Corrente Alternada; Comprimidos Magnéticos.

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AÇÃO DA MELATONINA E DO EXERCÍCIO FÍSICO NO ESTRESSE OXIDATIVO E NO PROCESSO INFLAMATÓRIO NO FÍGADO DE RATOS CIRRÓTICOS

MARTINS, Gabriela1,2@; ROSA, Carlos Gustavo3; COLARES, Josieli2; BRASIL, Marilda1,2; ENGEROFF, Millena1; ADAMI, Gabriela1; PICADA, Jaqueline3; MARRONI, Norma1.

@Autor correspondente: Gabriela Martins. gabriela_martins96@hotmail.com

Introdução: A cirrose hepática caracteriza-se pelo surgimento de septos e nódulos fibróticos, bem como alterações estruturais e funcionais do fígado. A obstrução prolongada do ducto biliar é um modelo experimental eficaz para indução de cirrose biliar secundária. A Melatonina (MLT) é um hormônio lipofílico sintetizado a partir de serotonina vem sendo estudada devido suas propriedades, incluído seu potencial antioxidante. Objetivo: Avaliar a ação da MLT e do exercício físico (EX) no fígado de ratos cirróticos, submetidos ao modelo experimental de ligadura de ducto biliar (LDB). Metodologia: Foram utilizados 48 ratos Wistar machos, divididos em oito grupos: Controle (CO), CO+MLT, CO+EX, CO+MLT+EX) LDB, LDB+MLT, LDB+EX e LDB+MLT+EX. Os tratamentos ocorreram do 15° ao 28° dia pós-operatório. A dose da MLT foi de 20 mg/kg administrada via i.p. (1 x ao dia), e para a realização do EX, os animais foram colocados para nadar em pares por 10min/dia. Amostras de sangue foram coletadas para as análises de AST, ALT e FA, o fígado foi coletado para análise histológica, lipoperoxidação (LPO) e atividade das enzimas, catalase (CAT), superóxido dismutase (SOD) e Glutationa peroxidase (GPx). A análise estatística utilizada foi ANOVA Student-Newman-Keuls significativo quando (p<0,05). Projeto aprovado: 2018/516 - CEUA da ULBRA. Resultados: As enzimas de integridade hepática AST, ALT e FA tiveram uma redução significativa nos grupos LDB+MLT, LDB+EX e LDB+MLT+EX quando comparados ao grupo LDB (p≤0,01). Na avaliação da lipoperoxidação (LPO) observou-se um aumento significativo no grupo LDB quando comparado aos grupos controles e uma redução nos grupos LDB+MLT, LDB+EX e LDB+MLT+EX quando comparado ao grupo LDB (P<0,05). Na avaliação das enzimas antioxidantes CAT, SOD e GPx foi observado um aumento significativo no grupo LDB em relação aos grupos controles e uma diminuição significativa no grupo LDB+MLT, LDB+EX e LDB+MLT+EX (P<0,05). Na análise histológica por HE observa-se desorganização tecidual e infiltrado inflamatório no grupo LDB, evidenciamos uma reorganização do parênquima, nos grupos LDB+MLT, LDB+EX e LDB+MLT+EX. Na imunohistoquímica (NF-kB), e uma marcação positiva da coloração no grupo LDB, em contraste, a marcação foi mínima nos animais do grupo LDB+MLT, LDB+EX e LDB+MLT+EX. CONCLUSÃO: A melatonina e o exercício físico foram eficazes na restauração dos diferentes padrões avaliados em ratos submetidos ao modelo de cirrose induzida por LDB.

Palavras-chave: Cirrose; Melatonina; Exercício fisico.

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AÇÃO DA QUERCETINA EM RATOS COM CIRROSE HEPÁTICA INDUZIDA POR DIETILNITROSAMINA

ADAMI, Gabriela Girardi1@; ENGEROFF, Millena de Oliveira1; SCHEMITT, Elizângela Gonçalves2; FONSECA, Sandielly Rebeca Benitez da2; MARTINS, Gabriela dos Santos3; BRASIL, Marilda da Silva3; MARRONI, Norma Possa2,3,4.

@Autor correspondente: Gabriela Girardi Adami. gabrielaad@ufcspa.edu.br.

Introdução: As hepatopatias são responsáveis por consideráveis números de atendimentos e internações hospitalares e, portanto, representam um grande problema de saúde pública: a cirrose é uma das maiores causas e apresenta crescente índice de mortalidade. A cirrose hepática de humanos e suas alterações hepáticas podem ser reproduzidas por meio do modelo de cirrose por dietilnitrosamina (DEN). A quercetina (Q) é um dos flavonoides mais abundantes da dieta e pode ser encontrada em muitos vegetais e seus derivados, sendo reconhecida por reduzir o efeito oxidativo e citotóxico. Objetivo: Avaliar a ação da Q na modulação da homeostase celular no modelo experimental de cirrose hepática induzida por DEN. Método: Foram utilizados 24 ratos machos Wistar (peso médio de 130 gramas) divididos nos grupos CO, CO+Q, DEN, DEN+Q. Foram submetidos à administração de 50 mg/Kg de DEN i.p. (2x/semana por 7 semanas) e receberam fenobarbital na água de beber na dose de 0,3g/dl como indutor enzimático. A Q (50mg/Kg i.p.) foi iniciada na 5ª semana, perdurando até o final na 7ª semana. Ao final do experimento foi coletado o sangue para as análises de enzimas de integridade hepática AST e ALT e o fígado para as demais análises. Foram avaliados os pesos dos animais, a relaçãohepatossomática, a lipoperoxidação por TBARS e a atividade das enzimas CAT eGST. Projeto aprovado CEUA/HCPA: 14-0311. Resultados: O grupo DEN apresentou menor ganho de peso (em gramas) ao final do experimento quando comparado ao grupo CO (356,00±10,69; 549,64±28,82) (p<0,001). No grupo DEN observou-se uma relação hepatossomática (11,75%) maior que o grupo CO (3,16%) e o grupo DEN+Q (8,24%) (p<0,05). Foi observado um aumento dos níveis de TBARS (em nmol/mg Prot) no grupo DEN (0,659±0,083) em relação ao grupo CO (0,156±0,012) e uma diminuição no grupo DEN+Q (0,197±0,021) em relação ao grupo DEN (p<0,05). Na atividade da enzima CAT (em pmol/min/mg Prot) foi observada uma diminuição significativa no grupo DEN (2,382±0,205) em relação ao grupo CO (3,676±0,628) e um aumento significativo no grupo DEN+Q (4,548±0,777) quando comparado a grupo DEN (p<0,05). Na atividade da GST (µmol/min/mg Prot) verificou-se um aumento da atividade no grupo DEN (1,638±0,09) em comparação ao grupo CO (1,135±0,04) e uma diminuição significativa no grupo DEN+Q (1,145±0,01) em relação ao grupo DEN (p<0,01). Conclusão: A julgar pelos dados avaliados, é sugerido que a administração de DEN produziu efeito tóxico no fígado e a Q mostrouse capaz de atenuar os danos hepáticos neste modelo experimental.

Palavras-chave: Quercetina; Cirrose; Dietilnitrosamina.

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ACONSELHAMENTO MÉDICO E MEDO-EVITAÇÃO NA DOR LOMBAR

PESTANA, Priscylla Ruany Mendes1@; SILVA, Fredson Danilo1; SANTOS, Rodrigo Alves de Carvalho1; DURÃES, Renata Ribeiro1; RODRIGUES, Ana Carolina de Melo Alves1; SOARES, Lidiane Santos1; BRAGA, Ana Paula dos Santos Xavier1; SOUSA, Adriene dos Santos1; REIS, Jeane Fraga1; FREIRE, Rafael Silveira1.

@Autor correspondente: Priscylla Ruany Mendes Pestana. priscyllapestana@gmail.com.

Introdução: dor lombar (DL) é definida como uma dor localizada abaixo da margem costal e acima das dobras glúteas inferiores, podendo ou não estar associada à dor nas pernas. Sua prevalência estimada em algum momento da vida é de até 84%, tornando-se crônica em até 40% dos casos. Indivíduos com DL crônica podem apresentar comportamentos de medo-evitação relacionados ao movimento, devido à crença que este pode ser prejudicial ao seu quadro. O aconselhamento médico é um componente importante no processo de reabilitação. Aconselhamentos para se manter minimamente ativo podem prevenir ou minimizar comportamentos de medo- evitação, que, em geral, estão relacionados à recomendações de repouso absoluto. Objetivo: o presente estudo tem como objetivo investigar a influência do aconselhamento médico no comportamento de indivíduos com DL crônica. Método: trata-se de um estudo transversal de caráter descritivo e análise quantitativa realizado na cidade de Montes Claros-MG. O projeto de pesquisa foi previamente aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa da FUNORTE com parecer 4.951.879 /2021. A amostra foi composta por 30 indivíduos com DL crônica que tinham sintomas a mais de 3 meses. Foram excluídos os indivíduos com doenças graves na coluna, com histórico de cirurgia na coluna, pacientes psiquiátricos/psicológicos e gestantes. A coleta dos dados ocorreu de setembro a novembro de 2021. A avaliação do comportamento de medo-evitação foi através do Fear Avoidance Beliefs Questionnaire (FABQ), a intensidade de dor foi avaliada através da Escala Visual Analógica e foi utilizado um questionário semiestruturado para as demais variáveis. Para analisar as médias do escore do FABQ dos indivíduos que receberam aconselhamento para repouso e dos que não receberam, foi utilizado o teste de Mann-Whitney, para a correlação entre intensidade de dor e os escores do FABQ foi utilizado o teste de correlação de Spearman. Para todas as análises foi adotado um nível de significância de 95%. Foi utilizado o Software Statistical Package for the Social Sciences - 25®. Resultados: 66,7% dos indivíduos receberam aconselhamento médico para repouso, 60% desses foram aconselhados a se manter em repouso por mais de sete dias e 50% foram orientados a se afastar do trabalho. A média do escore do FABQ dos indivíduos que receberam aconselhamento para repouso foi superior à média daqueles que não receberam, com diferença estatisticamente significante. Observou-se correlação moderada positiva entre intensidade de dor e os escores do FABQ no domínio trabalho. Conclusão: constatou-se alta prevalência de aconselhamento médico para repouso por longo período e altos escores de medo-evitação nos domínios atividades físicas e trabalho. Esses resultados despertam a necessidade da implementação de práticas mais atuais na abordagem de pacientes com DL crônica.

Palavras-chave: Lombalgia; Repouso; Licença Médica.

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AEROBIC EXERCISE TRAINING IN TEMPERATE OR HOT ENVIRONMENTS SIMILARLY IMPROVES PERFORMANCE AND INDUCES A FAST TO SLOW FIBER TYPE SHIFT

ZANETTI, Gustavo O.1@; PESSOA, Pedro W. M.1; VIEIRA, Tales S.1; BARBOSA, Nicolas H. S.1; GARCIA, Rodrigo1; WANNER, Samuel P.1; SOARES, Danusa D.1; GONÇALVES, Dawit A. P.1,2; MORGAN, Henrique J. N.3; SCHAVINSKI, Aline Z.3; HECK, Lilian C.3; NAVEGANTES, Luiz C.3; KETTELHUT, Isis D.4.

@Autor correspondente: Gustavo Oliveira Zanetti. E-mail: goliveirazanetti@gmail.com.

Introduction: Heat (H; ≥32°C) stress acutely worsens aerobic performance. However, H has emerged as a potential therapy to modulate muscle metabolism inducing aerobic phenotype and it is unknown the effects of training in this condition for long periods (> 4weeks) on muscle fiber type and trophism and intracellular pathways regulating muscle phenotype. Objective: To evaluate the morphological, metabolic and molecular adaptations in skeletal muscle induced by long-term aerobic physical training (APT) in H. Methods: Adult, male Swiss mice (40g) were divided in: 1) Sedentary (SED) mice kept in the temperate (T) environment (22°C;SED/T), 2) SED kept in H (32°C;SED/H), 3) mice trained (TRA) in treadmill (1h/day, 5days/week, 8weeks, 60% of maximum speed (Smax)) in T (TRA/T), and 4) TRA in H (TRA/H). All groups performed incremental load tests in T and H before (pre-training) and after 4 and 8 weeks of training. The liver and muscle glycogen content were measured by Anthrone method and mitochondrial activity. Muscle fiber types were determined by analyzing SDH activity and myosin-heavy chain (MyHC) isoforms by immunofluorescence techniques in histological slices. The content and activity of muscle proteins involved in protein synthesis/degradation (Akt/FoxO) and energy metabolism (AMPK-p38/PGC1α) were quantified by western blot (WB). All experimental procedures were approved by the Ethics Committee on the Use of Animals – CEUA-UFMG (220/2019). Results: In pre-training period, H impaired performance by reducing (~30%) SMAX. After 8weeks, although TRA/H exercised at a lower (26%) absolute intensity than TRA/T, SMAX were similarly increased (~22%) in both TRA groups compared with SED/T. The liver glycogen content also increased by ~34% in the TRA/T, TRA/H and SED/H groups when compared to SED/T. The skeletal muscle SDH activity increased ~9% in both TRA groups when compared with SED/T. SED/H group increased (~15%) cross sectional area (CSA) of oxidative fibers with no additional effects of TRA. The protein content of slow (type 1) and fast (type 2) MyHC by WB did not change in any condition, but % of type 2A fibers was higher (~16%) in both TRA groups than in SED/T group. The protein content of mitochondrial oxidative phosphorylation complexes (OxPhos) as well as mitochondrial membrane (TOM20) and the intracellular regulators of these organelles and oxidative fiber phenotype (i.e., AMPK-p38/PGC1α and TFEB) were not altered in any group. Molecular analysis revealed that TRA/H group reduced the content of FoxO1 (~30%; an inducer of protein degradation and energy metabolism and an inhibitor of angiogenesis). Conclusion: Although exercise in H is performed at a lower absolute intensity, training in both environments similarly improved performance and increased the proportion of type 2A fibers, the activity of the mitochondrial enzyme SDH, and the hepatic content of glycogen. Thus, the similar improvement in physical performance of TRA in H and T appears to be due to a change in fiber type to a more oxidative phenotype. Furthermore, training in H could be used as a therapeutic approach to manage patients who were unable to perform moderate-high intensity exercise (i.e., obese and muscle-joint injured recovery) due to mechanical overload.

Keywords: Mitochondria; Heat stress; Skeletal muscle metabolism; mitochondria; signaling pathways.

Supported by FAPEMIG (APQ-01268-2), PRPq/UFMG (27764*27) and CNPq/PROANTAR (442645/2018-0)

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ALTERAÇÕES EPIGENÉTICAS E NEUROINFLAMATÓRIAS EM PROLE MASCULINA COM COMPORTAMENTO SEMELHANTE AO AUTISMO DECORRENTE DA OBESIDADE MATERNA

DE NOVAIS, C. O.1@; ROJAS, V. C. T.1; DA SILVA, R. A.2; GIUSTI-PAIVA, A.1; VILELA, F. C.3.

@Autor correspondente: Cintia O. de Novais. cintia.novais@sou.unifal-mg.edu.br.

Introdução: A obesidade é uma doença inflamatória crônica que está associada ao desenvolvimento de várias comorbidades. Estudos vêm demonstrando a relação entre a obesidade materna e prejuízos no neurodesenvolvimento dos descendentes, sendo que um dos transtornos do neurodesenvolvimento mais comum é o Transtorno do Espectro Autista (TEA). Estudo anterior do nosso grupo demonstrou que a obesidade materna induzida por redução de ninhada induziu alterações comportamentais semelhantes ao TEA principalmente na prole masculina, porém os mecanismos associados com essas alterações ainda não foram elucidados. Objetivo: Investigar em filhotes machos os mecanismos epigenéticos e neuroinflamatórios associados com os sintomas semelhantes ao TEA decorrentes da obesidade materna. Método: Utilizamos a redução de ninhada (NNG1: 6 machos e 6 fêmeas; NRG1: 2 machos e 2 fêmeas) em ratos Wistar para gerar a obesidade precoce. Na prole masculina (G2) foi avaliada: o comportamento de brincar e o reconhecimento de objetos durante o período juvenil (PND28-PND32) para caracterizar os sintomas semelhantes ao TEA. Ao final dos testes comportamentais, os animais foram eutanasiados e estruturas encefálicas, córtex pré-frontal (CPF) e hipocampo (HIPO) dissecados para procedimentos epigenéticos, como a quantificação da expressão do repressor transcricional REST e das enzimas que metilam e desmetilam o DNA através da PCR e para avaliar a quantidade de GFAP, uma proteína marcadora de astrócito por Western Blotting. Os resultados obtidos foram expressos como média ± E.P.M e analisados por teste t de Student. Todos os experimentos foram conduzidos com aprovação do Comitê de Ética de Uso de Animais (26/2021). Resultados: Referente ao comportamento, observamos uma redução no tempo total de brincadeira (116.9±15,73 para 59,50±27.69s, p<0,01) e no índice de reconhecimento de objetos no tempo de 2h (0,58±0,05 para 0,35±0,05, p<0,05). Referentes as análises epigenética, foi observada uma redução na expressão do REST tanto no CPF (1,02±0,09 para 0,53±0,05, p<0,01), quanto no HIPO (1,03±0,09 para 0,36±0,11, p<0,01) e um desbalanço epigenético nas enzimas que metilam e desmetilam o DNA, com uma redução no CPF (DNMT1: 1,03± 0,10 para 0,70± 0,05, p<0,05; DNMT3B: 1,07±0,15 para 0,86, p<0,01; e no HIPO (DNMT3A: 1,11±0,17 para 0,45±0,07, p<0,05) e um aumento no HIPO (TET2: 1,01±0,05 para 6,99±1,90, p<0,01). Nesses animais também foi observado uma maior quantidade de astrócito (GFAP) tanto no CPF (100,0±15,29 para 143,9±9,85, p<0,05) quanto no HIPO (96,91±11,27 para 153,0±19,86, p<0,05) quando comparados aos machos filhos de mães NN. Conclusão: A obesidade materna induz comportamentos semelhantes ao TEA e provoca alterações epigenéticas e neuroinflamatórias na prole masculina.

Palavras-chave: Sistema nervoso central; Dano ao DNA, Neuroinflamação.

Apoio financeiro: CAPES, CNPQ e Fapemig.

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ANÁLISE DA CONDIÇÃO DE SAÚDE BUCAL E FATORES ASSOCIADOS DE IDOSOS ATIVOS EM GOVERNADOR VALADARES-MINAS GERAIS

RIBEIRO, Camilla Sthéfany do Carmo1@; CARVALHO, Rodrigo Furtado2; SALAS, Mabel Miluska Suca3; SILVA, Clarice Lima Alvares4; LEMOS, Cleidiel Aparecido Araújo5.

@Autor correspondente: Camilla Sthéfany do Carmo Ribeiro. camillascr97@gmail.com.

Introdução: O número de idosos tem crescido e estudos demonstram que problemas de saúde bucal podem influenciar a saúde e funcionalidades gerais, causando estado de dor e sofrimento, e prejudicando processos funcionais, estéticos e nutricionais, estando relacionada na terceira idade com o bem estar e a satisfação com a vida. No entanto existem poucas pesquisas sobre saúde oral e envelhecimento ativo. Objetivo: Analisar as condições de saúde oral de idosos ativos residentes em Governador Valadares-MG. Método: A coleta de dados foi realizada por avaliadores calibrados através de oficinas de 32 horas. Os dados foram coletados por meio de questionário e exame clínico bucal, realizado sob luz natural em cadeira comum utilizando sonda e espelho. Foram selecionados 64 idosos que faziam parte de 7 diferentes estratégias de saúde com o objetivo de garantir uma maior diversidade das variáveis. A análise estatística foi realizada através do Stata® versão 13.0 (Stata Corp. College Station, Estados Unidos). Resultados: Dos 64 idosos que participaram, a maioria do sexo feminino (64,06%), e a média de idade foi de 68,37 anos. A maioria dos participantes tinha renda entre 1 a 3 salários mínimos (51,56%) e nível de escolaridade até o fundamental incompleto (54,69%). Quanto à avaliação de saúde geral, mais da metade da amostra autorreferiram como regular (56,35%). Quanto à satisfação com o sorriso, a maioria da amostra estava satisfeita ou muito satisfeita (65,63%). Quando abordados sobre eficiência mastigatória, 60,94% da amostra relatou eficiência mastigatória boa ou muito boa e 67,19% da amostra estavam satisfeitos ou muito satisfeitos com a qualidade da alimentação. O índice de CPOD médio foi de 23,25± 7,99, sendo perda dentária a condição mais comum. A presença de cálculo dentário apresentou maior prevalência no sextante inferior central. A maior parte da amostra usava prótese superior/inferior, sendo prótese total removível a mais usada na arcada superior (45,31%) e prótese parcial removível (21,28%). Associações positivas foram encontradas entre escolaridade e CPOD (p=0, 0277) e instruções de higiene (p= 0,032). Associação entre o índice CPOD e apoio social foi estatisticamente significativa, no que se refere à convivência com outras pessoas (p= 0,003). Houve correlação entre satisfação com o sorriso e avaliação de saúde geral (p=0,004). Conclusão: A saúde oral de idosos ativos de Governador Valadares-MG é precária com alta prevalência de perdas dentárias, uso e necessidade de prótese. Constatou-se que a saúde oral pode influenciar na qualidade de vida dos idosos ativos e no processo de envelhecimento ativo, uma vez que associações significativas foram encontradas entre: CPOD e convivência com outras pessoas; satisfação com o sorriso e autoavaliação de saúde geral; escolaridade e CPOD e ao recebimento de informações acerca da saúde oral.

Palavras-chave: Idosos; Envelhecimento Ativo; Saúde oral.

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ANÁLISE DA ORTOLOGIA DE ADESINAS DE CEPAS DE Candida auris

SOUZA, Josiany Costa C.1@; PADOVAN, Ana Carolina Barbosa2.

@Autor correspondente: Josiany Costa C. Souza. cjosiany@gmail.com.

Introdução: Adesinas fúngicas são complexos proteicos responsáveis pelo processo de adesão em superfícies bióticas e abióticas, pela interação que biofilmes tem com substratos e também pelas modificações na morfologia da colônia fúngica, denotando características únicas no processo de infecção. Candida auris é uma levedura patogênica emergente, responsável por causar diversas infecções fúngicas. Ela apresenta altos níveis de infecção e resistência a mais de uma classe de antifúngicos, como também, a produtos de descontaminação. A colonização pode-se iniciar na pele e em outros sítios do corpo e persiste por muito tempo, favorecendo a contaminação dos ambientes pelo fungo. Apesar de sua identificação primária ter sido em 2009 no Japão, C. auris tem evoluído e se espalhado, chegando ao Brasil em um surto em Salvador em 2020. Existem atualmente cinco grupos ou clados que divergiram em regiões diferentes do mundo e que apresentam características de virulência e resistência distintos. Contudo, pouco se sabe sobre as diferenças de adesinas nesses grupos. Objetivo: Nesse sentido, o presente trabalho objetivou descrever adesinas de C.auris presentes em três clados evolutivos apresentando a ortologia existente entre elas. Método: Foram realizadas análises in sílico de proteomas obtidos do NCBI-GenBank de C. auris B8441 (clado I, Paquistão), B11221 (clado III, Africa do Sul) e B11245 (clado IV, Venezuela) sendo este último, encontrado também no Brasil. Os proteomas foram analisados no FungalRV (https://fungalrv.igib.res.in/) para buscas por adesinas. As adesinas preditas foram analisadas na ferramenta OrhoFinder para verificar a ortologia. Resultados: Os protemas extraídos do NCBI tiveram, respectivamente, a quantidade de 5.419, 5.521 e 5.506 proteínas nos clados I, III e IV. Desses, o FungalRV resultou como adesinas 112 (2%) proteínas no clado I, 113 (2%) no clado III e 127 (2,3%) no clado IV. O OrhoFinder mostrou que 321 adesinas são ortólogas, com a formação de 100 grupos ortólogos, sendo 82 deles com adesinas semelhantes entre os três clados. O maior grupo contém 17 adesinas (6 representantes do clado I, 6 do clado III e 5 do clado IV). Já o menor grupo, com 2 adesinas possuía 1 representante do clado I e 1 do IV. As análises ainda mostraram 3 adesinas únicas não-ortólogas nos clados I e III, e 25 adesinas no clado IV, o mais diverso. Estudos apontam que os clados I, III e IV são os mais resistentes e com difícil controle em todo o mundo, além disso esses três clados dispõem de alta resistência aos azólicos e equinocandinas, enquanto o clado I e IV são resistentes a fluconazol e a anfotericina B. Conclusão: Observa-se a necessidade de conhecer as adesinas desse patógeno emergente, tendo em vista o alto número de compartilhamento de adesinas ortólogas, bem como conhecer mais sobre as adesinas únicas no clado IV, que é responsável por surtos no nordeste do Brasil e pode se espalhar pelo país. Dessa forma, será mais efetiva a aplicação de medidas mitigadoras com a finalidade de promover o controle de surtos desse fungo resistente principalmente em unidades hospitalares ao qual as pessoas ficam expostas.

Palavras-chave: Levedura emergente; Clado; Proteoma.

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ANÁLISE DO ENVELHECIMENTO DE MEMBRANAS DE BORRACHA NATURAL INCORPORADAS COM EXTRATO DE COPAIFERA OBLONGIFOLIA

HOCHBERGER, Luana Caroline1@; MARQUES-JÚNIOR, Jair1; GAMA, Loyane Almeida2; AMÉRICO, Madileine Francely2; SOUZA, Nara Cristina de2; SOUTO, Paula Cristina de Souza1,2.

@Autor correspondente: Luana Caroline Hochberger. hochbergerluana@gmail.com.

Introdução: Os biomateriais, na medicina regenerativa, estão sendo estudados como substitutos ou como indutores do reestabelecimento da estrutura e função de tecidos ou órgãos danificados. Dentre os biomateriais de origem vegetal, o látex de Hevea brasiliensis (borracha natural) vem se destacando por ser um material biodegradável, biocompatível, elástico e com capacidade de promover angiogênese. Outro biomaterial que pode ser utilizado na medicina regenerativa é o extrato de frutos de copaíba. Os frutos de Copaifera oblongifolia (copaíba) possuem efeitos terapêuticos devido a presença de diterpenos, sesquiterpenos β-cariofileno. Dentre esses efeitos pode se destacar ações cicatrizantes, anti-inflamatórias, antitumorais e antioxidante. Assim, curativos provenientes da associação de borracha natural com extrato copaíba são um material promissor, pois combinam propriedades dos dois ativos melhorando o processo de cicatrização de lesões de difícil cicatrização. Objetivo: Avaliar o processo de envelhecimento de membranas de borracha natural com copaíba (NRC) submetidas a condições controladas de tempo, luminosidade e presença de oxigênio. Método: O látex foi coletado utilizando o método de “sangria” em espiral no município de Pontal do Araguaia MT e estabilizado com hidróxido de amônio 4%. Os frutos de copaíba foram coletados e foi realizada a técnica de extração por rotaevaporação. As membranas de borracha natural incorporadas com copaíba (NRC) foram polimerizadas em estufa na temperatura 40°C durante 48h (Tempo zero), calculou-se o índice de borracha seca (DRC). As membranas foram divididas em grupos: membranas embaladas que ficaram na presença ou ausência de luz, sendo as embaladas à vácuo e sem vácuo, durante 30, 60 e 90 dias, posteriormente foram analisadas através da técnica de espectroscopia de infravermelho (FT-IR) para analisar os constituintes químicos, microscopia de varredura (MEV) para analisar morfologia de superfície das membranas, molhabilidade e atividade antioxidante. Resultados: Os aspectos macroscópicos foram analisados e as membranas apresentaram características translucidas e flexíveis tanto as do tempo zero como as do período de envelhecimento. Os testes de molhabilidade indicaram que as membranas permaneceram hidrofílicas independente da condição de armazenamento. Os resultados de FT-IR mostraram que as membranas mantiveram as estruturas típicas de poli- cis-1,4-isopreno, com a incorporação do extrato de copaíba na matriz polimérica de NR ocorreu apenas a mudança na intensidade das bandas não houve o surgimento de novas bandas, sendo assim, um indicativo de interação entre dois materiais e esta característica se manteve durante o período de envelhecimento. Nas análises por microscopia eletrônica de varredura, não houveram alteração na morfologia das membranas. Em todas as membranas analisadas não foram observados poros em sua morfologia, apenas partículas de borracha e agregados de partículas de copaíba dispersas na matriz polimérica. As membranas NRC apresentaram atividade antioxidante mesmo após 90 dias, sendo os valores deste grupo bem semelhantes aos valores encontrados para as membranas do tempo zero. Conclusão: Diante dos resultados obtidos membranas de NRC é um material promissor para o tratamento de lesões de pele de difícil tratamento, como a queimadura e apresentam-se estáveis, pois mantiveram as características químicas, morfológicas e antioxidante no decorrer do tempo envelhecimento.

Palavras-chave: Borracha natural; Copaíba; Envelhecimento.

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ANÁLISE DO POLIMORFISMO rs4646437 DO GENE CYP3A4 EM PACIENTES COM CÂNCER DE BEXIGA E INDIVÍDUOS CONTROLES

SILVA, Isabely Mayara1@; KAWASAKI, Julia Ayumi Ikeda1; RODRIGUES, Milene Roldão de Souza1; PINHEIRO, Laís Capelasso Lucas1; GUEMBAROVSKI, Roberta Losi1; BARCELOS, Gustavo Rafael Mazzaron2; CÓLUS, Ilce Mara de Syllos1; SERPELONI, Juliana Mara1.

@Autor correspondente: Isabely Mayara Silva. isabely.silva20@uel.br.

Introdução: O câncer de bexiga (CaB) é a neoplasia mais comum em órgãos do sistema urinário. Ele acomete ambos os sexos, porém, em homens a ocorrência desse câncer é 4 vezes maior que nas mulheres. De acordo com o Instituto Nacional do Câncer (INCA) brasileiro, cerca de 10.600 novos casos foram diagnosticados em 2020 no país. Neste contexto, o estudo de fatores que influenciam no CaB é importante para a identificação de indivíduos mais suscetíveis à doença, bem como a tumores de pior prognóstico ou com maiores chances de recidiva. A proteína CYP3A4, codificada pelo gene homônimo, é responsável pela metabolização de compostos endógenos e exógenos, participando das reações de oxidação na fase I do metabolismo de drogas. Variantes polimórficas nesse gene podem resultar em indivíduos com diferentes capacidades de metabolização de xenobióticos. Objetivo: Dentro deste contexto, o presente estudo teve como objetivo analisar a frequência da variante polimórfica rs4646437 (G>A) do gene CYP3A4 em pacientes com CaB e compará-la com as frequências de indivíduos controles, bem como associar os resultados dos pacientes com hábito tabagista, exposição a agrotóxicos e tipo histológico de tumor (invasivo ou não invasivo ao músculo). Método: Foram genotipados 268 pacientes e 215 controles por meio da técnica de PCR em tempo real utilizando sonda TaqMan®. Todos os indivíduos participaram de forma voluntária, assinaram um termo de consentimento livre e esclarecido e preencheram questionário pessoal. As análises estatísticas empregadas foram regressões logísticas multinominais para avaliar o impacto do polimorfismo rs4646437 do gene CYP3A4, sobre a incidência ou não de CaB, ajustados para as variáveis sexo, hábito tabagista, exposição a agrotóxicos e tipo histológico do tumor. Os resultados foram analisados por meio do programa IBM SPSS Statistics 23. Resultados: Para o genótipo prevalente GG foram encontradas as frequências de 67,2% em pacientes e 66,2% nos indivíduos controle. A frequência de indivíduos heterozigotos foi de 25% em pacientes e 29,2% nos controles, enquanto os homozigotos raros (AA) foram 7,8% e 4,2% em pacientes e controles, respectivamente. Os resultados obtidos por regressão logística múltipla, ajustada por sexo, hábito tabagista, exposição a agrotóxicos e tipo histológico do tumor não evidenciaram nenhuma associação significativa com a variante alélica (p>0,050). Conclusão: Considerando a amostra de pacientes e controles analisada até o momento, os resultados sugerem que o polimorfismo rs4646437 parece não conferir suscetibilidade ao desenvolvimento ou ao prognóstico do câncer de bexiga. Entretanto, nosso grupo de pesquisa está trabalhando para ampliar o número amostral de pacientes (até N=300), bem como parear, na totalidade, por sexo e idade controles e pacientes, o que pode, futuramente, indicar algum papel para o gene CYP3A4 nesta neoplasia maligna.

Palavras-chave: Neoplasia; suscetibilidade; sistema urinário.

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ANÁLISE DO POLIMORFISMO RS25487 NO GENE XRCC1 EM PACIENTES COM CÂNCER DE BEXIGA

RODRIGUES, Milene Roldão de Souza1@; SILVA, Isabely Mayara1; GUEMBAROVSKI, Roberta Losi1; BARCELOS, Gustavo Rafael Mazzaron2; CÓLUS, Ilce Mara de Syllos1; SERPELONI, Juliana Mara1.

@Autor correspondente: Milene Roldão de Souza Rodrigues. mileneroldao@gmail.com.

Introdução: O câncer de bexiga (CaB) aparece entre os 10 mais prevalentes no mundo, apresentando taxas de incidência e mortalidade que variam de acordo com seus principais fatores de risco, como sexo, hábito tabagista e exposição ocupacional. Apesar de sua alta incidência, o diagnóstico precoce da doença, é, por vezes, bastante limitado, devido aos sintomas serem pouco específicos. Além disso, os métodos diagnósticos são limitados à baixa sensibilidade ou a técnicas invasivas, como a cistoscopia. Sendo assim, faz-se necessária a busca por biomarcadores menos invasivos e que possam predizer suscetibilidade e/ou prognóstico de pacientes com essa neoplasia maligna. Objetivo: O presente estudo teve como objetivo avaliar a possível associação entre o polimorfismo rs25487 (C/T), localizado no gene X-Ray Repair Cross Complementing 1 (XRCC1) e a suscetibilidade ao CaB. Método: Foram analisados 277 pacientes e 238 indivíduos livres da doença, pareados de acordo com sexo, idade e hábito tabagista. A genotipagem foi realizada por PCR em tempo real utilizando sonda Taqman. A associação foi calculada por Odds Ratio (OR) com intervalo de confiança de 95%, obtida por regressão logística univariada por meio do programa IBM SPSS Statistics 23. Resultados: Para o genótipo prevalente CC foi observada a frequência de 47,7% nos pacientes e 37,3% nos controles. A frequência de heterozigotos (CT) foi de 44,2% nos pacientes e 38,7% nos controles, enquanto os homozigotos raros (TT) foram 6,0% e 7,7% em pacientes e controles, respectivamente. Nenhum resultado significativo foi observado em relação aos genótipos CT [OR = 0,607 (0,31-1,20) p=0.151] e TT [OR = 0,680 (0,34-1,35) p=0.268] e a suscetibilidade ao CaB. Conclusão: Na presente amostra, o polimorfismo rs25487 não se mostrou como um marcador candidato de suscetibilidade ao CaB. No entanto, o número amostral tanto de pacientes como de controles pareados está sendo aumentado, o que poderá indicar diferentes associações, bem como aumentar as informações sobre o papel do gene XRCC1 na neoplasia maligna da bexiga.

Palavras-chave: variante alélica; neoplasia maligna de bexiga; suscetibilidade.

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ANÁLISE INTEGRATIVA DOS DADOS MULTIÔMICOS DE DOS CÂNCERES DE PRÓSTATA E MAMA

CAMPOLINO, Luana1@; PORTELA, Luiz2; FERREIRA, Marcel3; FIORETTO, Matheus²; CAMARGO, Ana Carolina²; SILVA, Patricia ²; RIBEIRO, Isabelle²; SANTOS, Sergio²; JUSTULIN JR, Luís².

@Autor correspondente: Luana Campolino. luana.campolino@unesp.br.

Introdução: Nos últimos anos vendo observado um aumento significativo da incidência de cânceres na população mundial, tendo correlação com dieta rica em alimentos ultra processados, sedentarismo, tabagismo, poluição, aumento da expectativa de vida e adversidades durante o desenvolvimento embrionário. Os mais recorrentes são os cânceres de próstata (CaP) e mama (CaM) em homens e mulheres, respectivamente, excluindo câncer de pele não-melanoma, tornando-se um problema de saúde pública e afetando a qualidade de vida dos portadores da neoplasia. A próstata e a mama são glândulas acessórias do sistema genital e sua homeostase e processos patológicos estão sob controle hormonal. Sabe-se que CaP e CaM apresentam certa similaridade em mecanismo genéticos e epigenéticos que vão desde a morfogênese, até a progressão tumoral. Há na literatura descrição de moléculas e vias de sinalização compartilhadas entre os canceres de próstata e mama. No entanto, mesmo com o advento das multiômicas, não há trabalhos integrando perfis globais de eventos genéticos e epigenéticos (metilação, mRNA e miRNA) que contribuem para a carcinogênese dos tecidos reprodutivos, sendo assim, nesse trabalho buscamos compreender estes mecanismos e identificar potenciais alvos terapêuticos. Objetivo: Identificar mecanismos genéticos e epigenéticos, que estão comumente desregulados nos CaP e CaM, buscando identificar assinaturas epigenéticas, vias moleculares e potenciais alvos terapêuticos que sejam responsivos a tratamentos. Método: Para isso, foram utilizados dados de sequenciamento de última geração de mRNA, miRNA e metilação de DNA, advindos do The Cancer Genome Atlas (TCGA), dos estudos de adenocarcinoma prostático (PRAD-TCGA, 498 amostras tumorais e 52 controle) e carcinoma de mama invasivo (BRCA-TCGA, 1085 amostras tumorais e 112 controle). Foram considerados diferencialmente expressos (DE) mRNAs e miRNAs cujo log2 de fold change > |±1| e FDR > 0,01. Os dados globais de metilação foram considerados diferencialmente metilados com β-value > |±0,25| e FDR > 0,01. Foram integrados dados de miRNA- mRNA de CaP e CaM na plataforma miRWalk 3.0. As integrações metilação-mRNA foram realizadas a partir da correlação entre Log2 de fold change e βvalue Resultados: . Dados de CaP mostraram 3.007 genes DE (2326 down e 681 up), 177 miRNAs DE (34 down e 143 up), e 12.146 regiões metiladas (2.584 hipo e 9.562 hipermetiladas). Foram identificados 3.556 genes DE no CaM (2.138 down e 1.418 up), 372 miRNAs DE (107 down e 265 up) e 12.962 regiões metiladas (5.477 hipo e 7.485 hiper). CaP e CaM demonstraram 1.325 genes em comum (1.047 down e 278 up). 78 miRNAs foram comumente desregulados (7 down e 71 up), com 3.594 regiões metiladas (725 hipo e 2.869 hiper). A integração entre miRNAs e mRNAs validados reportaram 8 miRNAs regulando 9 mRNAs; e a integração entre a metilação e os mRNAs mostraram 229 genes down regulados com hipermetilação no DNA e 7 genes up regulados com hipometilação. Conclusão: Assim os nossos dados, ainda que preliminares, sugerem potenciais mecanismos genéticos e epigenéticos como assinaturas dos cânceres de próstata e mama, podendo ser alvos terapêuticos.

Palavras-chave: Reprodução; Câncer; Multiômicas; TCGA.

Financiamento: FAPESP.

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APLICAÇÃO DA TÉCNICA DE AMPLIFICAÇÃO ISOTÉRMICA DE DNA MEDIADA POR LOOP (LAMP) EM ISOLADOS DE Candida spp.

HERTER, Amanda1,2,3@; SCHIRMER, Helena2; SEVERO, Cecília B.2; MATTEVI, Vanessa S.1,3.

@Autor correspondente: Amanda Herter. amandahe@ufcspa.edu.br.

Introdução: A prevalência das doenças invasivas com elevadas taxas de mortalidade causadas por fungos oportunistas tem aumentado, sendo o gênero Candida o principal agente etiológico. O diagnóstico laboratorial destas infecções permanece difícil e demorado, o que impede o tratamento adequado, principalmente em pacientes de alto risco. A técnica de amplificação isotérmica de DNA mediada por loop (LAMP) se apresenta como uma alternativa promissora ao diagnóstico convencional por ser rápida, precisa e de baixo custo. Objetivo: Avaliar a eficácia da metodologia de LAMP na detecção de isolados de Candida spp. Método: A técnica de LAMP foi aplicada em 94 isolados de Candida spp. provenientes da micoteca do Laboratório de Micologia da Universidade Federal de Ciências da Saúde de Porto Alegre: C. albicans (n=20), C. glabrata (n=20), C. tropicalis (n=20), C. parapsilosis (n=16), C. orthopsilosis (n=16) e C. metapsilosis (n=2). Inicialmente, uma suspensão fúngica (concentração de 0.5 McFarland) de cada isolado foi fervida com a resina Chelex 100. Em seguida, procedeu-se a reação de LAMP, utilizando o kit WarmStart Colorimetric LAMP 2x Master Mix (DNA&RNA) da New England Biolabs, com protocolo adaptado para volume final de reação de 10 μL. Um conjunto de cinco a seis primers específicos para cada espécie analisada foi produzido conforme referências da bibliografia. Para controle de especificidade, além das espécies estudadas, utilizou-se isolados de C. krusei, C. auris, Cryptococcus spp. E Rodothorula spp. Resultados: A especificidade da técnica de LAMP para todas as espécies de Candida spp. foi de 100%. A sensibilidade diagnóstica para 40 minutos de reação variou entre 75% (para C. tropicalis) e 100% (para C. metapsilosis), dependendo da espécie. Já a sensibilidade analítica (limite de detecção) foi de 100 pg / μL de DNA. Conclusão: Este estudo contribui para as áreas de diagnóstico, pesquisa e inovação. A técnica de LAMP demonstrou ser eficaz na identificação das diferentes espécies de Candida, apresentando ótimos resultados de sensibilidade e especificidade. Estes resultados indicam que a metodologia pode ser estudada para outros microrganismos, podendo ser utilizada para fins de inovação nos setores de diagnóstico e de biotecnologia, bem como aplicada na área de pesquisa em diversas frentes. Além disso, considerando a facilidade da técnica, bem como seu baixo custo, os resultados obtidos até aqui sugerem a viabilidade de sua implantação em laboratórios pequenos e que dispõem de poucos recursos (apenas um banho-maria é suficiente para sua execução). Por fim, pretende-se, ainda, analisar o desempenho do LAMP diretamente em amostras clínicas.

Palavras-chave: Candida; Técnica de LAMP; Diagnóstico.

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APRENDIZADO DE MÁQUINA E “SOFTWARE” OPEN-SOURCE NA ELABORAÇÃO DE RECONSTRUÇÕES TRIDIMENSIONAIS PARA O ESTUDO DE NEURÔNIOS HUMANOS E ESPINHOS DENDRÍTICOS

RENNER, Josué1@; KNAK GUERRA, Kétlyn T.2; VÁSQUEZ, Carlos E. 2; RASIA FILHO, Alberto A.1,2.

@Autor correspondente: Josué Renner. josuere@ufcspa.edu.br.

A descrição da estrutura tridimensional (3D) do corpo neuronal, da ramificação dendrítica e dos espinhos dendríticos dos neurônios é essencial para a compreensão de como ocorre o processamento de informações no sistema nervoso ao longo da filogenia, mormente à complexidade que existe no ser humano. Frequentemente, esses componentes da estrutura neuronal apresentam conformações espaciais múltiplas, tornando necessária a elaboração de reconstruções 3D digitais para estudos morfológicos mais detalhados e precisos. A elaboração dessas reconstruções é, no entanto, desafiadora devido às questões relacionadas com a disponibilidade de “software” e com a complexidade do tecido nervoso e dificuldades técnicas inerentes ao processamento histológico de amostras postmortem humanas. O presente trabalho teve como objetivo aplicar e desenvolver procedimentos de reconstrução 3D a fim de estudar a forma de neurônios humanos e seus espinhos dendríticos impregnados pela técnica de Golgi sob microscopia óptica de campo claro. A partir de imagens de microscopia de luz capturadas sequencialmente ao longo do eixo espacial ‘z’, o “software” open-source Neuromantic foi utilizado para a elaboração de reconstruções 3D e obtenção de dados morfométricos dos corpos celulares e ramificações dendríticas dos neurônios de von Economo presentes no córtex cingulado anterior e de neurônios com corpo celular fusiforme no pré-cúneo humanos. Para o estudo da presença, distribuição, número e diferentes formas dos espinhos dendríticos desses neurônios, reconstruções 3D foram feitas com algoritmo computacional na plataforma comercial MATLAB® com imagens microscópicas de maior aumento. De modo a evitar o uso adicional de “software” comercial, por causa de altos custos impeditivos e menor acesso a todos os pesquisadores, a presente pesquisa também objetivou desenvolver um método adicional, simples, acessível e confiável para a reconstrução 3D de espinhos dendríticos com “software” gratuito. Para isso, utilizouse o “software” open-source ilastik, que emprega algoritmos de aprendizado supervisionado de máquina para a segmentação de imagens. Esse novo método foi aplicado para a composição de reconstruções 3D dos espinhos dendríticos de neurônios do núcleo cortical do complexo amigdaloide humano, mas pode ser utilizado a priori em diversas outras áreas nervosas igualmente. As ferramentas computacionais que permitiram a elaboração das reconstruções 3D geraram dados morfológicos imprescindíveis sobre a forma do soma, orientação espacial dos ramos dendríticos nos três eixos espaciais e da presença, distribuição, número e forma diversa dos espinhos dendríticos dos neurônios estudados. Neurônios corticais e subcorticais humanos (e de outros animais) podem ser reconstruídos para estudos ontogenéticos, filogenéticos e hodológicos em cada área de interesse e/ou tipo neuronal relevante bem como para a investigação de alterações morfológicas de estruturas neuronais em doenças neurológicas e psiquiátricas. Por utilizar “software” que estão gratuitamente disponíveis para download e uso, o presente trabalho disponibiliza como realizar tais estudos e viabiliza o desenvolvimento de pesquisas nas quais as reconstruções 3D neuronais tornam-se acessíveis, mesmo com poucos recursos disponíveis, com qualidade, relevância internacional e atualidade dos dados obtidos, contribuindo para o conhecimento humano na área da Morfologia e das Neurociências.

Palavras-chave: Neurônios de von Economo; Técnica de Golgi; Reconstruções tridimensionais (3D) de imagem; Aprendizado de máquina; espinhos dendríticos.

Financiamento: O presente estudo foi realizado com recursos do Laboratório de Fisiologia da Universidade Federal de Ciências da Saúde de Porto Alegre (UFCSPA), da CAPES (Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior) e do CNPq (Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico). O estudo também contou com suporte para pagamento integral de taxa para publicação de artigo científico proveniente da Carl von Ossietzky Universität Oldenburg, da Alemanha.

Aprovações éticas: Este trabalho foi aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa (CEP) da UFCSPA sob os pareceres de número 3.285.063 e 4.787.433. Também foi aprovado pelo CEP da UFRGS sob o parecer de número 5.036.809.

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AROMATERAPIA DE SINERGIA AROMÁTICA FRENTE A ANSIEDADE: UM ESTUDO CLÍNICO RANDOMIZADO, DUPLO CEGO, CONTROLADO POR PLACEBO

ALMEIDA JÚNIOR, Silvio de1,2@; LIMA, João Vitor de Sousa3; MELO, Eveline Maria de²; BATISTA, Arthur Gasetta¹; PANSANI, Fabiola Maniglia²; FURTADO, Ricardo Andrade²,³.

@Autor correspondente: silvio.junior@uemg.br.

Introdução: O uso de medicamentos alopáticos para controle de ansiedade, em especial benzodiazepínicos, é uma boa escolha para casos agudos, entretanto, se faz necessário estudos com metodologias integrativas que apresentem resultados positivos e menor efeito adverso, na intenção de encontrar uma opção não farmacológica para controle de ansiedade. Material e Métodos: Para tal, foi utilizado uma sinergia aromática de óleos essenciais via inalatória para identificar o efeito biológico desejado, 2x ao dia, durante 21 dias. Para mensuração dos parâmetros de interesse, foi utilizado o formulário DASS21 para identificação de escore de ansiedade geral, através de um estudo clínico randomizado, duplo cego, controlado por placebo, registrado junto a REBEC (RBR-5xp737h) e plataforma Brasil (CAAE: 48301621.3.0000.5495). Foi utilizado essência de flor de cerejeira como controle placebo, apresentando apenas características odorantes. Resultados: A sinergia aromática formulada para a condução do estudo clínico, apresenta em sua constituição 15,4% de acetato de linalila, 15,2% de eucaliptol, 14,6% de linalol, 5,1% de mentol, 5,5% de patchoulol, 5% de cânfora e 39,2% de outros compostos em pequenas quantidades. Ocorreu o recrutamento de 164 participantes, entretanto, apenas 64 foram elegíveis ao final do estudo, sendo estratificado no grupo controle placebo (25 participantes) e grupo intervenção de sinergia aromática (39 participantes). Quanto ao sexo, 81,2% eram mulheres e quanto a idade, o grupo placebo apresentou 21,9 ± 6,2 anos (18,0 – 42,0 anos) enquanto o grupo tratado com a sinergia aromática apresentou 20,5 ± 5,4 anos (18,0 – 44,0) não apresentando diferença estatística p = 0,2756 (t=1,097, df=94). Quanto ao nível geral de ansiedade, foi identificação uma redução de 62,3% (p = 0.0001) do grupo tratado com a sinergia aromática e uma redução de 47,7% (p = 0.0001) no grupo tratado com placebo, sendo essa diferença estatisticamente significativa (p = 0.0138) com efeito da amostra em 0,88 pelo d de Cohen. Discussão: Indicadores na literatura relatam efeito ansiolítico e calmante de óleos essenciais constituídos por acetato de linalila, linalol e patchoulol, níveis de cânfora, mentol e eucaliptol, apresentando redução do nível de estresse, o que pode impactar diretamente no controle da ansiedade. Conclusão: A partir dos resultados é possível indicar que o uso da sinergia aromática via inalatória pode reduzir níveis de ansiedade geral por metodologia não farmacológica, entretanto, outros estudos devem ser conduzidos para melhor compreensão dos mecanismos de atividade biológica encontrada.

Palavras-chave: Práticas Integrativas e Complementares; Óleos essenciais; Medicina Popular; Psicopatologias; Aromaterapia; DASS21.

Financiamento: CAPES (cod 001), CNPq, UNIFRAN.

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ASPECTOS MOLECULARES DA TIREOIDE: CONTROLE DE QUALIDADE DE MATERIAL RESIDUAL DE BIÓPSIA POR PAAF-US

SOLERA, Geise Lilian Menezes1; OLIVEIRA, Cáren Nunes2; ZANDONÁ, Marília Remuzzi²; MEYER, Erika Laurini de Souza3,5; IZQUIERDO, Rogério4; GOLBERT, Lenara³,5; MATTEVI, Vanessa Suñé²@.

@Autor correspondente: Vanessa Suñé Mattevi. vmattevi@ufcspa.edu.br.

Justificativa: Nódulos da tireoide tem alta prevalência na população quando avaliados por ultrassonografia (US), porém apenas cerca de 5%-15% consistem em câncer da tireoide (CDT). A biópsia por punção aspirativa com agulha fina guiada por ultrassom (PAAF-US), seguida de avaliação citológica, permite o diagnóstico benigno ou maligno na maioria dos casos, contudo, 20-30% dos nódulos são de citologia indeterminada. A maioria é encaminhada à cirurgia, porém apenas 15%-30% correspondem a CDT. Assim, torna-se fundamental estabelecer novas abordagens diagnósticas, como a utilização de marcadores tumorais, visando promover o manejo adequado destes casos e minimizando procedimentos desnecessários. No entanto, a quantidade de células obtidas através da PAAF-US é pequena e nem sempre adequada para análise, sendo necessária a otimização de protocolos para este tipo de material. Objetivo: Estabelecer e otimizar técnicas de extração de ácidos nucleicos a partir de material residual de biópsia por PAAF-US. Método: Foram avaliados 215 pacientes, dos quais 72 tiveram amostras coletadas durante a PAAF-US, resultando em 91 amostras biológicas para avaliação molecular. O controle de qualidade para análise molecular se deu a partir da quantificação dos ácidos nucleicos no material isolado, além da proporção das células epiteliais tireoidianas dentro da amostra. Para esta última avaliação, foram realizados testes de expressão comparando o gene constitutivo GAPDH, expresso uniformemente em todos os tipos celulares, e o gene da citoqueratina 7 (KRT7), expresso em células epiteliais específicas, incluindo células da tireoide. Para a análise da qualidade e quantidade do material obtido, a amostra foi considerada satisfatória quando a expressão do GAPDH estava abaixo de 35 ciclos de threshold (Ct) e com uma diferença de até 3,5 ciclos entre a expressão do gene alvo e o gene constitutivo, indicando presença de pelo menos 10% de células da tireoide. A expressão gênica foi avaliada por RT-PCR quantitativa em tempo real com detecção por sondas de hidrólise. Resultados: Oitenta amostras tiveram DNA e RNA extraídos pelo protocolo de co-extração otimizado no laboratório. Das 80 amostras, 53 (66,25%) foram consideradas satisfatórias, apresentando assim quantidade suficiente de células da tireoide para análises subsequentes das mutações nos genes a serem analisados. O DNA extraído foi quantificado por espectrofotometria através do equipamento BioSpec-nano (Shimadzu, Quioto), obtendo-se concentrações variando entre 3,82 ng/µL e 417,46 ng/µL. Conclusões: Houve sucesso no estabelecimento de uma metodologia in-house, de baixo custo, para co-extração de RNA/DNA que foi validada a partir do controle de qualidade pré-estabelecido e por quantificação de DNA extraído. A maioria das amostras analisadas apresentou quantidade e qualidade de DNA e de RNA satisfatórias para a realização da investigação molecular. A realização desta etapa de controle de qualidade das amostras obtidas mostrou-se importante para assegurar a confiabilidade dos resultados subsequentes e para evitar o desperdício de recursos e tempo naquelas amostras inadequadas. Em sequência, serão investigadas as mutações nos genes BRAF, RAS e TERT, que auxiliarão na avaliação do prognóstico desses pacientes.

Palavras-chave: Nódulos indeterminados; Teste molecular; PAAF.

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